凝膠成像系統,顧名思義以一套可對凝膠進(jìn)行成像的光學(xué)系統,而光源便是其光路系統的重要組成部分,可以說(shuō)沒(méi)了光源,成像系統幾乎無(wú)法運行使用,但與CCD、鏡頭以及分析軟件相比,往往卻沒(méi)有得到應有的重視。我們經(jīng)常遇到這樣的用戶(hù),他們知道系統光源出現故障或整個(gè)系統報廢的時(shí)候都不知道凝膠成像透射紫外中有305nm與365nm兩種紫外燈管,或者搞不清他們之間有何區別。這其中固然有銷(xiāo)售商售后的不到位,但也反映出我們對凝膠成像系統光源的不重視和缺乏足夠的了解,為此我們撰以此文,以期幫助用戶(hù)理清他們的區別和各自的作用,讓您能夠更好的選擇購買(mǎi)、使用以及保養維護凝膠成像系統。
下面我們對凝膠成像系統的各種光源及其用途做簡(jiǎn)要介紹,首先是雙側反射白光光源,也是我們使用最多的光源,通常作為系統照明光源使用,即放置或調整DNA膠或蛋白膠位置,或在對鏡頭調整聚焦時(shí)使用,當然在對非透明材質(zhì)的蛋白膠或其他成像物質(zhì)進(jìn)行成像時(shí)也需開(kāi)啟反射白光。
其次透射白光,即通常所說(shuō)白光板,主要用于蛋白質(zhì)膠拍攝時(shí)使用,因為白光板位于透射紫外燈箱上方,所以為不影響透射紫外光源的使用,同時(shí)也更節約室內空間,白光板一般可以折疊豎立在箱體后部。
透射紫外光源,即紫外透射燈箱,主要用于DNA膠拍攝,由于DNA常用的熒光染料是EB,而用標準302nm紫外光透射儀激發(fā)并放射出橙紅色信號,可用帶CCD成像頭的凝膠成像系統拍攝到,所以透射紫外的波長(cháng)通常是305nm段。
紫外反射燈源,一般為選配件,主要原因是其使用并不廣泛,只是在非透明材質(zhì)的DNA跑膠載體如紙層析等的成像才需要使用。往往比較常用的還是透明的瓊脂糖凝膠與聚丙烯酰胺凝膠,透射光源*可以滿(mǎn)足,所以大部分廠(chǎng)家都只將紫外反射光源作為選配,只是在儀器上預留了位置與接口。
還有需要指出的是抽拉式托盤(pán)的使用,由于化學(xué)發(fā)光成像無(wú)需任何光源,屬自發(fā)光成像,但由于化學(xué)發(fā)光的信號比較微弱,不穩定,同時(shí)上等化學(xué)發(fā)光凝膠成像系統的鏡頭往往是手動(dòng)聚焦,所以需要一個(gè)高度可調的托盤(pán)專(zhuān)門(mén)供化學(xué)發(fā)光成像使用。
除此之外,上文提到的三色LED燈光源是3個(gè)高光強反射激發(fā)器(475納米、534納米、632納米),為多色熒光成像系統的比不可少的組成部分。暗箱還預留連續波長(cháng)光源光纖接口,以便于將來(lái)擴展至連續波長(cháng)光源(激發(fā)光的波長(cháng)范圍400-750nm),涵蓋了一些需要特殊激發(fā)光的熒光,多應用于多色熒光(Cy3/Cy5)和活體成像。